在压力蒸汽灭菌后残留在管腔骨科器械中的碎片是无菌的吗?

发布时间:2019-02-13 02:18      

Kenneth Smith,医学博士,美国亚拉巴马州阿拉巴马大学伯明翰分校

IbukunoluwaAraoye,外科学硕士

译自:AJIC 2018.9 P1009

翻译:美国鲁沃夫(中国)培训中心

背景

许多外科医生都曾经在手术中发现空心钻头或铰刀内有残留的生物污染物。有人认为残留的污染物在经过清洗和压力蒸汽灭菌后为无菌,但没有实验依据支持这一设想。本研究的目的是确定压力蒸汽灭菌后管腔手术器械中的生物残留的无菌性。

材料与方法

研究设计

使用15个空心钻头钻取清洁的猪肩胛骨,得到留在钻头套管中的5-8mm长的圆柱形骨栓。在进一步处理之前,将12个钻头暴露于蜡状芽孢杆菌、铜绿假单胞菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的混合物中60、120或180分钟(每个时间段3个钻头)。在这12个钻头中选3个作为阳性对照,不进行灭菌。其余的3个钻头作为阴性对照,仅暴露于无菌水中。于是我们有了5个独立的组,每组3个钻头(图1)。将钻头进行压力蒸汽灭菌,然后检查细菌生长。

图1. 实验方案

污染与灭菌

过程按照严格的顺序进行,从第3组钻头(180分钟等待时间)开始,然后是第2组钻头(120分钟等待时间),第1组钻头(60分钟等待时间),阳性对照钻头(60分钟等待时间)和阴性对照钻头。

整个过程使用无菌手套在干净的工作空间中进行。吸移2ml细菌接种物滴入钻头管腔中的骨中心,让钻头直立便于重力帮助细菌渗透。以这种方式污染12个钻头。等待时间结束后,除阳性对照外,其它钻头装入灭菌纸塑袋后放入预真空压力蒸汽灭菌器,132.2°C灭菌4分钟,干燥40分钟。

灭菌后测试

压力蒸汽灭菌后测试所有15个钻头的细菌生长。使用无菌克氏针将钻头内腔中的骨芯抽空到15mL离心管中。然后将5mL巯基乙酸盐肉汤无菌地通过钻头的中心注入同一离心管中,目的是从钻头的中心部分洗下残留的骨屑。涡旋混合物后,移取100μL并涂布到TSA上进行细菌定量(第0天涂布板)。将剩余的培养基在37℃下培养5天。培养48小时后,将巯基乙酸盐溶液划线到TSA(48小时划线板)上。

每天观察评估管和培养板的任何细菌生长。划线接种阳性生长,通过革兰氏染色、菌落形态和生物化学特征鉴定微生物。具有与原始实验细菌相似的形态和生化特性的微生物送到独立实验室进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)基因分型,确认它们是否确实是相同的细菌菌株。

结果

对照组

所有3个阳性对照钻头均为原始蜡状芽孢杆菌、MRSA和铜绿假单胞菌阳性。阴性对照组3个钻头中有两个呈阳性,但阳性细菌与实验细菌不同,可能代表最初存在的非测试细菌或收集或处理时的污染。一个钻头在48小时生长棒状杆菌和凝固酶阴性葡萄球菌。

阴性对照组中的第二个钻头在48小时生长凝固酶阴性葡萄球菌和芽孢杆菌物种,其形态与最初接种的蜡状芽孢杆菌不同。PFGE后发现该芽孢杆菌菌株与接种的芽孢杆菌不同。

实验组

60分钟组中的一个钻头在48小时培养后出现阳性生长,呈现的过氧化氢酶阳性芽孢杆菌形态与原始接种的蜡状芽孢杆菌不同。在整个培养期间,60分钟实验组中的另外2个钻头呈阴性。120分钟组中的两个钻头在48小时时出现芽孢杆菌属阳性增长,形态与最初接种的蜡状芽孢杆菌不同。PFGE证实这些芽孢杆菌属与原始接种的蜡状芽孢杆菌不同。120分钟实验组中的一个钻头完全阴性。

在180分钟组中,1个钻头出现芽孢杆菌属阳性生长,其外观和形态与原始接种的蜡状芽孢杆菌相似的。PFGE证实该分离物与最初接种的蜡状芽孢杆菌几乎无异。其他2个钻头为阴性。

讨论

本体外研究结果表明,标准压力蒸汽灭菌可能无法有效杀灭管腔器械上骨组织内的所有细菌,与之前研究认为的压力蒸汽灭菌可消除所有细菌相悖。

我们的研究结果强调需要彻底及时清洗管腔类器械,去除管腔中残留的生物污染物。消毒供应中心(CSSD)的工作人员应更加认识这一点。鉴于经过3小时的暴露时间后培养结果为阳性,我们建议迅速清洁严重污染的手术器械。一种方法是可以让手术室人员在手术结束后去除大块污染物并使管腔通畅,再回收器械。

结论

残留的骨和其他生物污染物可能会妨碍管腔类器械的彻底灭菌,特别是在处理前等待时间很长的情况下。减少外科手术器械受污染发生率的进一步战略应包括对CSSD和手术室工作人员的持续培训以及对再处理方案的定期监测。

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